Kromatografiya şil rêbaza sereke ye ji bo ceribandina naveroka her pêkhateyek û nepakiyên di madeyên xav, navber, amadekarî û malzemeyên pakkirinê de, lê gelek maddeyên xwedan rêbazên standard nînin ku xwe bispêrin wan, ji ber vê yekê pêşkeftina rêbazên nû neçar e. Di pêşkeftina rêbazên qonaxa şil de, stûna kromatografiyê bingeha kromatografiya şil e, ji ber vê yekê meriv çawa stûnek kromatografiya maqûl hilbijêrin girîng e. Di vê gotarê de, nivîskar dê rave bike ka meriv çawa stûnek kromatografiya şil ji sê aliyan ve hilbijêrin: ramanên giştî, raman û qada serîlêdanê.
A. Ramanên giştî ji bo hilbijartina stûnên kromatografiya şil
1. Taybetmendiyên fizîkî û kîmyewî yên analytê binirxînin: wek strukturên kîmyewî, çareserbûn, aramî (mîna ku ew hêsan e ku were oksîd kirin / kêm kirin / hîdrolîz kirin), asîtî û alkalînîteyê, hwd., nemaze strukturên kîmyewî sereke ye. faktora di diyarkirina taybetmendiyan de, wekî koma hevgirtî xwedan vegirtinek ultraviyole ya bihêz û floransek bihêz e;
2. Armanca analîzê diyar bikin: gelo veqetandina bilind, karbidestiya stûnê ya bilind, dema analîzê ya kurt, hesasiyeta bilind, berxwedana zexta bilind, jiyana stûnê ya dirêj, lêçûnek kêm, hwd.
- Stûnek kromatografiya guncan hilbijêrin: pêkhate, taybetmendiyên laşî û kîmyewî yên dagirtina kromatografiyê, wekî mezinahiya perçeyê, mezinahiya porê, tolerasyona germahiyê, tolerasyona pH, adsorpkirina analytê, hwd.
- Nêrînên ji bo hilbijartina stûnên kromatografiya şil
Ev beş dê li ser faktorên ku divê dema hilbijartina stûnek kromatografiyê ji perspektîfa taybetmendiyên fîzîkî û kîmyayî yên stûna kromatografiyê bi xwe ve were hesibandin nîqaş bike. 2.1 Matrixa Filler
2.1.1 Matrixa silica gel Matrixa dagirtî ya piraniya stûnên kromatografiya şil, silica gel e. Ev cureyê dagirtin xwedan paqijiya bilind, lêçûnek kêm, hêza mekanîkî ya bilind e, û gûhertina grûpên hêsan e (wek girêdana fenîlê, girêdana amînî, girêdana cyano, hwd.), lê nirxa pH û rêjeya germahiya ku ew tehemûl dike sînordar e: Rêjeya pH ya pir dagirên matrixê silicagel ji 2 heta 8 e, lê rêza pH ya qonaxên girêdana silicagelê yên bi taybetî hatine guheztin dikare bi qasî 1.5 heya 10 be, û di heman demê de qonaxên girêdana gêla silica ya bi taybetî hatine guheztin hene ku di pH-ya nizm de domdar in. wek Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, ku di pH 1 heta 8 de domdar e; sînorê germahiya jorîn a matrixa silica gel bi gelemperî 60 ℃ e, û hin stûnên kromatografiyê dikarin germahiya 40 ℃ di pH-a bilind de tehemûl bikin.
2.1.2 Matrixa polîmer Dagirkerên polîmer bi piranî polistiren-dîvînîlbenzen an jî polîmetakrîlat in. Awantajên wan ev in ku ew dikarin rêjeyek pH-ê ya berfireh tehamul bikin - ew dikarin di navbera 1 heya 14-an de werin bikar anîn, û ew ji germahiyên bilind re berxwedêr in (dikarin bigihîjin jor 80 °C). Li gorî dagirtina C18-a-based silica, ev celeb dagirtina hîdrofobîteyek bihêztir e, û polîmera macroporous di veqetandina nimûneyên wekî proteînan de pir bi bandor e. Dezawantajên wê ev in ku karbidestiya stûnê kêmtir e û hêza mekanîkî ji ya dagîrkerên bingehîn ên silica qelstir e. 2.2 Şiklê particle
Piraniya dagîrkerên HPLC-ya nûjen perçeyên spherîkî ne, lê carinan ew perçeyên nerêkûpêk in. Parçeyên spherîk dikarin zexta stûnê kêmtir, karbidestiya stûnê ya bilind, aramî û jiyana dirêjtir peyda bikin; dema ku qonaxên mobîl-vîskozîteya bilind bikar tînin (wek asîdê fosforîk) an dema ku çareseriya nimûneyê zirav e, perçeyên nerêkûpêk xwedan rûberek taybetî ya mezintir e, ku ji çalakiya tevahî ya her du qonaxan re guncantir e, û bihayê wê jî kêm e. 2.3 Mezinahiya particle
Mezinahiya perçeyê her ku piçûktir be, karbidestiya stûnê û veqetandin bilindtir dibe, lê berxwedana tansiyona bilind xirabtir dibe. Stûna ku herî zêde tê bikar anîn stûna mezinahiya pariyên 5 μm ye; heke hewcedariya veqetandinê zêde be, dikare dagirtina 1,5-3 μm were hilbijartin, ku ji bo çareserkirina pirsgirêka veqetandinê ya hin matrixên tevlihev û nimûneyên pir-pêkhatî dibe alîkar. UPLC dikare dagirtina 1.5 μm bikar bîne; Ji bo stûnên nîv-amadekar an amadeker dagîrkerên 10 μm an mezintir têne bikar anîn. 2.4 Naveroka karbonê
Naveroka karbonê behsa rêjeya qonaxa girêdanê ya li ser rûyê silica gel e, ku bi qada rûbera taybetî û vegirtina qonaxa pêvekirî ve girêdayî ye. Naveroka karbonê ya bilind kapasîteya stûnê ya bilind û çareseriya bilind peyda dike, û bi gelemperî ji bo nimûneyên tevlihev ên ku ji hev veqetîna zêde hewce dikin tê bikar anîn, lê ji ber dema dirêjiya danûstendina di navbera her du qonaxan de, dema analîzê dirêj e; Stûnên kromatografiyê yên naveroka karbonê ya kêm xwedan demek analîzek kurttir in û dikarin hilbijartiyên cihêreng nîşan bidin, û pir caran ji bo nimûneyên hêsan ên ku hewceyê analîzek bilez û nimûneyên ku hewceyê şert û mercên qonaxa avê ya bilind hewce ne têne bikar anîn. Bi gelemperî, naveroka karbonê ya C18 ji% 7 heta 19% diguhere. 2.5 Mezinahiya porê û qada rûbera taybetî
Medyaya adsorpsiyonê ya HPLC perçeyên poroz in, û piraniya danûstendinan di poran de pêk tê. Ji ber vê yekê, molekul divê bikevin nav poran da ku werin vegirtin û veqetandin.
Mezinahiya porê û qada rûbera taybetî du têgehên hevgirtî ne. Mezinahiya porê piçûk tê wateya qada rûbera taybetî ya mezin, û berevajî. Qada rûberek taybetî ya mezin dikare pêwendiya di navbera molekulên nimûneyê û qonaxên pêvekirî de zêde bike, ragirtinê zêde bike, barkirina nimûneyê û kapasîteya stûnê zêde bike, û veqetandina pêkhateyên tevlihev. Dagirkerên bi tevahî poroz ji vî celebê dagirtî ne. Ji bo kesên ku hewcedariyên veqetandinê yên bilind hene, tê pêşniyar kirin ku dagîrkerên bi rûbera taybetî ya mezin hilbijêrin; Qada rûbera piçûk a piçûk dikare zexta paşde kêm bike, karbidestiya stûnê baştir bike, û dema hevsengiyê kêm bike, ku ji bo analîza gradientê maqûl e. Dagirkerên bingehîn ji vî celebê dagirtinan in. Li ser bingehê misogerkirina veqetandinê, tê pêşniyar kirin ku ji bo kesên ku bi hewcedariyên kargêriya analîzê yên bilind ve dagîrkerên bi rûbera piçûk a piçûk hilbijêrin. 2.6 Hêza pore û hêza mekanîkî
Hêjmara porê, ku wekî "volga porê" jî tê zanîn, bi mezinbûna qebareya vala ya per perçeyek yekîneyê vedibêje. Ew dikare hêza mekanîkî ya dagirtî baş nîşan bide. Hêza mekanîkî ya dagîrkerên bi qebareya pora mezin ji ya dagîrkerên bi qebareya pora piçûk hinekî qelstir e. Dagirkerên bi qebareya porê kêmtir an wekhev ji 1,5 mL / g bi piranî ji bo veqetandina HPLC têne bikar anîn, dema ku dagîrkerên bi qebareya porê ji 1,5 mL / g mezintir têne bikar anîn bi giranî ji bo kromatografiya derxistina molekulî û kromatografiya tansiyona kêm têne bikar anîn. 2.7 Rêjeya girtinê
Kepkirin dikare lûtkeyên dûvikê yên ku ji ber danûstendina di navbera pêkhate û komên silanolê yên xuyakirî de kêm bike (wek girêdana îyonî ya di navbera pêkhateyên alkaline û komên silanol, hêzên van der Waals û girêdanên hîdrojenê yên di navbera pêkhateyên asîd û komên silanol de), bi vî rengî kargêriya stûnê û şeklê lûtkeyê baştir dike. . Qonaxên pêvekirî yên bêserûber dê li gorî qonaxên pêvekirî, bi taybetî ji bo nimûneyên polar vebijarkên cihêreng çêbike.
- Qada serîlêdanê ya stûnên cûda yên kromatografiya şil
Ev beş dê di nav hin rewşan de qada serîlêdanê ya cûreyên cûda yên stûnên kromatografiya şil diyar bike.
3.1 Stûna kromatografiya C18-qonaxa berepaş
Stûna C18 stûna qonaxa berevajîkirî ya herî gelemperî tê bikar anîn, ku dikare ceribandinên naverok û nepakiyê yên piraniya maddeyên organîk bicîh bîne, û ji bo maddeyên pola navîn, qels polar û ne-polar ve tê sepandin. Pêdivî ye ku celeb û taybetmendiya stûna kromatografiya C18 li gorî daxwazên veqetandinê yên taybetî bêne hilbijartin. Mînakî, ji bo maddeyên bi hewcedariyên veqetandinê yên bilind, bi gelemperî taybetmendiyên 5 μm * 4,6 mm * 250 mm têne bikar anîn; ji bo maddeyên bi matrîsên veqetandinê yên tevlihev û polarîteyên mîna hev, taybetmendiyên 4 μm * 4,6 mm * 250 mm an mezinahiyên piçûktir dikarin werin bikar anîn. Mînakî, nivîskar stûnek 3 μm * 4.6 mm * 250 mm bikar anî da ku di celecoxib API-ê de du nepakiyên genotoksîk tespît bike. Veqetandina her du maddeyan dikare bigihîje 2.9, ku pir xweş e. Wekî din, di bin pêşgotina veqetandinê de, heke analîzek bilez hewce be, bi gelemperî stûnek kurt a 10 mm an 15 mm tête hilbijartin. Mînakî, dema ku nivîskar LC-MS/MS bikar anî da ku di API-ya piperaquine fosfatê de nepaqijiyek genotoksîkî bibîne, stûnek 3 μm * 2.1 mm * 100 mm hate bikar anîn. Cûdahiya di navbera nepakî û pêkhateya sereke de 2.0 bû, û tespîtkirina nimûneyek dikare di 5 hûrdeman de were qedandin. 3.2 Stûna fenîlê qonaxa berepaş
Stûna fenîl di heman demê de celebek stûna qonaxa berevajî ye. Ev celeb stûn ji bo pêkhateyên aromatîk xwedan bijartiyek bihêz e. Ger bersiva pêkhateyên aromatîk ên ku ji hêla stûna normal C18 ve têne pîvandin qels be, hûn dikarin li şûna stûna fenîlê bifikirin. Mînakî, dema ku min celecoxib API çêdikir, bersiva pêkhateya sereke ya ku ji hêla stûna fenîlê ya heman çêker û heman taybetmendiyê ve hatî pîvandin (hemû 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) bi qasî 7 carî ji stûna C18 bû. 3.3 Stûna Normal-qonaxa
Wekî pêvekek bi bandor a stûna qonaxa berevajîkirî, stûna qonaxa normal ji bo pêkhateyên pir polar maqûl e. Ger dema ku di stûna qonaxa berevajî de ji %90 zêdetir qonaxek avî tê şuştina lûtkeyê hîn pir zû ye, û tewra nêzikî lûtkeya çareserkerê jî be, hûn dikarin li şûna stûna qonaxa normal bifikirin. Ev celeb stûn stûna hilîk, stûna amînî, stûna cyano, hwd.
3.3.1 Stûna Hilîk Stûna Hilîk bi gelemperî komên hîdrofîlîk di zincîra alkilê ya girêdayî de vedihewîne da ku berteka li ser madeyên polar zêde bike. Ev celeb stûn ji bo analîzkirina madeyên şekir maqûl e. Nivîskar dema ku naverok û maddeyên têkildar ên xylose û jêderkên wê dike ev celeb stûn bikar aniye. Îzomerên hilberek xylose jî dikarin baş werin veqetandin;
3.3.2 Stûna Amino û stûna cyano Stûna Amino û stûna cyano bi rêzê ve danasîna guheztinên amino û cyano li dawiya zincîra alkilê ya girêdayî, bi rêzdarî, ji bo baştirkirina hilbijartî ji bo maddeyên taybetî re vedibêje: Mînakî, stûna amino bijarek baş e. ji bo veqetandina şekir, asîdên amînî, baz û amîd; stûna cyano dema ku maddeyên strukturel ên mîna hîdrojenkirî û nehîdrojenkirî ji hev vediqetîne ji ber hebûna girêdanên hevgirtî, hilbijartiyek çêtir heye. Stûna Amino û stûna cyano bi gelemperî dikarin di navbera stûna qonaxa normal û stûna qonaxa berevajî de werin guheztin, lê guheztina pir caran nayê pêşniyar kirin. 3.4 Stûna Chiral
Stûna Chiral, wekî ku ji navê xwe diyar dike, ji bo veqetandin û analîzkirina pêkhateyên chiral, nemaze di warê dermansaziyê de, maqûl e. Ev celeb stûn dikare were hesibandin dema ku stûnên qonaxa berevajî ya kevneşopî û stûnên qonaxa normal nikaribin veqetandina îzomeran bi dest bixin. Mînakî, nivîskar stûnek chiral 5 μm * 4,6 mm * 250 mm bikar anî da ku du îzomerên 1,2-dîfenîlethylenediamine ji hev veqetîne: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine û (1R, 2R)-1, 2. -diphenylethylenediamine, û veqetîna di navbera her duyan de gihîşt 2.0. Lêbelê, stûnên chiral ji celebên din ên stûnan bihatir in, bi gelemperî 1W + / perçe. Ger hewceyê stûnên weha hebe, pêdivî ye ku yekîne budceyek têr çêbike. 3.5 Stûna guheztina Ion
Stûnên danûstendina îyonan ji bo veqetandin û analîzkirina îyonên barkirî, yên wekî îyon, proteîn, asîdên nukleîk û hin madeyên şekir maqûl in. Li gorî celebê dagirtin, ew li stûnên danûstendina kation, stûnên pevguhertina anion, û stûnên danûstendina kationên bihêz têne dabeş kirin.
Stûnên danûstendina kationîk stûnên bingeh-kalsiyûm û hîdrojen-bingeh hene, ku bi gelemperî ji bo analîzkirina madeyên kationîk ên wekî asîdên amînî minasib in. Mînakî, nivîskar dema ku glukonate kalsiyûm û acetate kalsiyûmê di nav çareseriyek şûştinê de analîz dike stûnên bingehîn ên kalsiyûmê bikar anîn. Her du madde di λ=210nm de bersivên xurt hebûn, û pileya veqetandinê gihîşt 3.0; Nivîskar dema ku maddeyên girêdayî glukozê analîz dike stûnên hîdrojen-bingeha bikar anîn. Gelek maddeyên têkildar ên sereke - maltoz, maltotriose û fruktoz - di bin detektorên cihêreng de hestiyariyek bilind hebû, bi sînorê vedîtinê bi qasî 0,5 ppm û dereceyek veqetandinê 2,0-2,5.
Stûnên danûstendina anionê bi gelemperî ji bo analîzkirina madeyên anionîk ên wekî asîdên organîk û îyonên halojen minasib in; stûnên danûstendina kationên bihêz xwedan kapasîteya pevguherîna îyonê û hilbijartîbûnek bilindtir in, û ji bo veqetandin û analîzkirina nimûneyên tevlihev maqûl in.
Ya jor tenê destpêkek e li ser celeb û rêzikên serîlêdanê yên çend stûnên kromatografiya şil ên hevpar ên ku bi ezmûna xweya nivîskar re têne hev kirin. Di serîlêdanên rastîn de celebên din ên stûnên kromatografiyê hene, wek stûnên kromatografiyê yên pora mezin, stûnên kromatografiyê yên pora piçûk, stûnên kromatografiyê yên têkildar, stûnên kromatografiyê yên pirmode, stûnên kromatografiya şil a bi performansa pir-bilind (UHPLC), stûnên kromatografiya şilavê yên superkrîtîk SFC), hwd. Ew di warên cûda de rolek girîng dilîzin. Pêdivî ye ku celebek taybetî ya stûna kromatografiyê li gorî avahî û taybetmendiyên nimûneyê, daxwazên veqetandinê û armancên din were hilbijartin.
Dema şandinê: Jun-14-2024